血清中磷脂去除的分析(CommaSep® PRP)

2020-01-07 16:31:25
逗点医疗
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最后编辑:逗点医疗 于 2020-01-07 16:38:06

一、设备和材料

1)CommaVac ® CommaMix 多功能混匀仪
2)CommaSep ® PRP 磷脂去除柱
3) CommaSep ® PPT 蛋白沉淀过滤板

二、仪器条件

仪器:FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱:Hypersil Gol.D aQ (2.1mm×100 mm, 1.9 μm)
柱温:35 ℃
样品温度:10 ℃
进样量:5 μL
流动相:A:Buffer A B:Buffer B
洗脱方式:梯度洗脱

表 1 流动相梯度洗脱条件

离子化方式:ESI+ 电喷雾电压:3500 V
鞘气压力:40 arb 辅气压力:2 arb
离子传输管:350 ℃ 辅气温度:320 ℃
采集方式:Precursor Ion Scan ( 子离子 184 m/z,母
离子范围 184~1000 m/z)

三、实验步骤

1、样品提取
1) 将 CommaSep ® PPT 96 蛋白沉淀过滤板置于 96 孔收集板上,加入 400 μL 沉淀剂。
2) 将 100 μL 血清样本分装加入到 96 孔蛋白沉淀过滤板各孔中。
3) 将蛋白沉淀板上端各孔封膜后,置于多功能混匀仪上,调节转速到 2000 rpm,充分混合 2 min,然后静置10 min,待蛋白沉淀完全。
4) 3000 rpm离心2 min,收集过滤液到96孔收集板中,待净化。
2、样品净化
1)活化: 向CommaSep ® PRP及各品牌去磷脂产品(规格均为 60 mg/1 mL)中加 2 mL 甲醇,弃去流出液。
2)净化: 取上述样品提取步骤,经过血清蛋白沉淀过滤后的收集液,过磷脂去除产品,收集流出液,过 0.22 μm 有机滤膜,上机分析。


四、实验结果

表 2 不同品牌的磷脂去除产品对比效果

结论:经过 UPLC-MS/MS 检测分析,逗点生物磷脂去除产品与市面类似产品的磷脂去除效果相当,均可满足测试要求。

五、订购信息

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