一、设备和材料

1）CommaVac^® CommaMix 多功能混匀仪
2）CommaSep^® SLE 96 孔固相支持液液萃取板
3）CommaVac^® 96 孔氮吹仪
4）CommaVac^® 96 孔正压提取装置

二、仪器条件

仪器：FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱：Waters Xbridge C18 (2.1mm×50 mm, 3.5 μm)
柱温：40 ℃
进样量：5 μL
流动相：A：Buffer A B：Buffer B
洗脱方式：梯度洗脱
表 1 流动相梯度洗脱条件

电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：35 arb
辅气压力：2 arb
离子传输管：350 ℃
辅气温度：340 ℃
采集方式：多反应监测
表 2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数

三、实验步骤

1、样品提取
取 100 μL 血清置 1.5 mL 离心管中，加入 100 μL 内标萃取液，2500 rpm 涡旋 1 min 混合均匀，7000 rpm 瞬离 10 s，再加入 100 μL 缓冲液，2500 rpm 涡旋 1 min混合均匀后 7000 rpm 瞬离 10 s。
2、样品净化
1） 上样：将预混合好的样液全部上样到 400 μL/mL 的SLE 板上，待全部样品浸润后静置 5 min。
2） 洗脱：用 2.10 mL 洗脱液分三次进行洗脱，最后一步洗脱结束，将SLE板与收集板整体放到正压装置上，开启压力至 10-15 psi，约 5 s，完全收集洗脱液。
3） 氮吹复溶：将洗脱液 40 ℃下用氮吹仪氮吹至干，使用 50 μL 复溶液复溶，2500 rpm 涡旋 3 min，2000rpm、4 ℃离心 1 min，上机进样检测。

四、实验结果

                              表 3 板内稳定性结果                                                                      表 4 加标回收率结果
 

                                                                     图 1 脂溶性维生素检测的色谱图

由以上数据表明：CommaSep^® SLE 96 孔固相支持液液萃取板对脂溶性维生素的检测回收率在 70-110% 之间，且稳定性好，满足测试要求。

五、订购信息